실험레포트 생화학실험 단백질 정제 결과 레포트

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[실험레포트] 생화학실험 단백질 정제 결과 레포트.hwp

본문 protein purification 실험 결과 레포트 실험 목적 - 미생물을 이용하여 대량 생산하였던 원하는 단백질만을 특이적으로 정제하려고 한다. 실험 원리 -affinity chromatography 효소의 기질 특이성과 같이 선택적으로 분리를 원하는 물질과 반응하는 특성을 가진 물질을 고정상으로 삼아 분리시키는 크로마토그래피이다. 예를 들어 효소와 기질, 항원과 항체, 호르몬과 수용체, 렉틴과 다당류, 핵산의 염기쌍 등의 사이에 작용하는 특이적 상호작용을 이용하여 상호작용물질의 한쪽을 불용성 담체에 공유 결합시킨 것을 크로마토그래피용 고정상으로 하고 다른 쪽을 복잡한 혼합계 중에서 선택적, 그리고 가역적으로 포착하여 순화시키는 목적으로 사용한다. 단백질을 특이적으로 분리해낼 수 있고 대량으로 분리해 낼 수 있다는 게 장점이지만 너무 비슷한 분자를 구분하기 쉽지 않고 같은 분자라도 이온성이 있어 산성일 때의 형태와 중성일 때의 형태만 따로 분리하기도 힘들다는 단점이 있다. - Histidine 과 Ni NTA resin resin 과 Histidine 이 배위공유결합을 한다. Histidine의 imidazole ring에 있는 질소 원자 에 결합하지 않았던 p오비탈의 전자쌍이 남아있는 두 전자 모두 resin과 배위공유결합을 형성한다. 이 때 imidazole은 Histidine과 기능 부분이 동일하여 resin과 경쟁적으로 결합하며 Histidine을 resin으로부터 분리 할 수 있다. 이번 실험에서는 정제하고자 하는 단백질에 미리 6개의 히스티딘을 표지하여서 대장균 내에서 발현시켰기 때문에 resin과 잘 결합할 수 있다. 이 때 imidazole을 첨가하여서 경쟁적으로 결합시키면 순도가 높은 Histidin이 표지된 단백질을 정제 할 수 있다. 실험 결과 단백질을 정제하고 이를 SDS-PAGE를 이용하여 크기를 통한 분리를 하였다. 왼쪽의 marker band를 이용하여 25~30kdalton의 크기를 확인할 수 있으나 band가 여러 개로 나오고 marker에 비해 band의 두께도 두껍게 나온 것으로 보아 순도는 그리 높지 않은 것으로 보인다. 하고 싶은 말 좀 더 업그레이드하여 자료를 보완하여, 과제물을 꼼꼼하게 정성을 들어 작성했습니다. 위 자료 요약정리 잘되어 있으니 잘 참고하시어 학업에 나날이 발전이 있기를 기원합니다 ^^ 구입자 분의 앞날에 항상 무궁한 발전과 행복과 행운이 깃들기를 홧팅 키워드 실험, 분리, 단백질, 결과, 결합, 공유