실험레포트 생화학 실험레포트

실험레포트 생화학 실험레포트

[실험레포트] 생화학 실험레포트.hwp

본문 분자생물학 유전학 종합실습 보고서 Ⅰ. 실험 목표 1. 플라스미드 DNA를 통한 박테리아의 형질전환을 관찰한다. 2. selection marker의 원리를 이해하고, 박테리아를 selection한다. 3. PCR에 필요한 재료와 PCR의 원리를 이해하고, 플라스미드의 일부분을 증폭한다. 4. selection한 박테리아로부터 플라스미드를 추출하여 제한효소와 반응시킨다. 5. 제한효소와 반응시킨 플라스미드와 PCR로 증폭한 DNA를 λ/HindⅢ 마커와 같이 아가로오즈 겔로 전기영동을 하여 나오는 결과를 분석하고 이해한다. Ⅱ. 이론적 배경 1. pBluescript SK & GDA의 구성 및 특징 그림 pBluescript Ⅱ SK(+)의 구성 Plasmid DNA의 일종인 pBluescript Ⅱ SK(+)는 그림 1 과 같이 구성이 되어있으며 형질 전환시 암피실린의 내성이 생기는 DNA가 selection marker로 쓰인다. 이번 실험에서는 pBluescript plasmid와 여기에 GDA단백질을 첨가한 pBlue-GDA plasmid를 사용하는데 GDA DNA가 들어가는 위치는 pBluescript plasmid의 lac Z 의 사이, 더 정확히 말하면 T3, T7 primer binding site의 사이에 들어가게 된다.(사용된 제한효소는 EcoRⅠ이다) 따라서 두 플라스미드의 차이는 lac Z 유전자의 정상 발현 여부이며 이는 실험에서도 두 플라스미드에 의해 형질전환 된 박테리아를 배양함으로써 그 차이를 눈으로 확인해 볼 수 있다. 2. PCR(polymerase chain reaction) 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)의 약자로서 DNA 중합효소를 이용, DNA의 양을 증폭시키는 기술이다. DNA 복제에 필요한 재료인 DNA polymerase, 주형DNA, primer, dNTP와 PCR reaction buffer, 증류수를 넣어서 master mix를 만든다. 이후에 증폭반응을 진행시키려면 DNA 이중나선의 구조를 단일가닥으로 풀어야 하는데, 이 과정을 온도를 올려서 진행시킨다. 약 94℃ 정도까지 올라간다. 단일나선으로 풀린 DNA에 primer와 중합효소가 특정 부위에 결합하고 합성이 되며 DNA가 2배가 된다. 이것이 1주기이며 시간에 따른 온도 조절을 통해서 주기의 수를 늘려 나가면 원하는 부분을 계속 증폭시킬 수 있는 것이다. 고온까지 올라가는 환경에서 단백질의 종류인 DNA polymerase가 제 기능을 할 수 있는 이유는 Taq DNA polymerase라는 특수한 중합효소를 사용하기 때문이다. 호열성 세균인 Thermus aquaticus에서부터 얻은 Taq 중합효소는 활성화 온도가 고온에 적합하며 94℃의 환경에서도 변형이 일어나지 않는다. 때문에 DNA를 합성하는 과정에 있어서 온도라는 문제가 해결이 됐다. 하지만 오류가 빈번이 일어나는 문제점이 있어서 현재는 고세균 Pyrococcus furiosus에서 얻은 Pfu 중합효소와 Taq 중합효소를 혼합하여 PCR에 주로 이용하고 있으며 다른 중합효소도 널리 이용된다. 3. Restriction Enzyme(제한효소) DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 2중 나선을 절단하는 Endonuclease로서 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해서 사용하는 특수한 효소다. 이 실험에서 사용한 제한효소는 EcoRⅠ으로, pbluescript plasmid내에 GDA DNA 가 들어간 곳이 EcoRⅠ으로 잘리는 절단부위이다. 그러므로 pblue-GDA plasmid를 EcoRⅠ과 반응시기면 pbluescript와 GDA 두 가닥으로 분리가 된다. 하고 싶은 말 좀 더 업그레이드하여 자료를 보완하여, 과제물을 꼼꼼하게 정성을 들어 작성했습니다. 위 자료 요약정리 잘되어 있으니 잘 참고하시어 학업에 나날이 발전이 있기를 기원합니다 ^^ 구입자 분의 앞날에 항상 무궁한 발전과 행복과 행운이 깃들기를 홧팅 키워드 효소, 중합효소, 중합, 제한효소, 플라스미드, 온도