레포트 플라스미드의 분리 실험보고서

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본문 플라스미드의 분리 이름 : 조훈 , 학번 : 2013103391 , 조 : 2조 , 2013년 4월 9일 1. 이론 - 플라스미드 : 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 환형 DNA분자로서, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 다른 세균세포에서도, 발현이 가능하기 때문에 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다. - 버퍼용액 : 완충용액이라고도 하며 외부에서 산이나 염기를 가해주어도 pH의 변화가 거의 없는 용액을 말한다. 다시 말하여 pH를 정하게 맞추어 주는 용액으로 보통 약산과 그 짝염기 혹은 약염기와 그 짝산으로 이루어진 용액이다. 대표적으로 아세트산 CH₃COOH와 그 짝염기 CH₃COONa를 들 수 있으며 일반적으로 약한산과 그 짝염기나 약한 염기와 그 짝산을 적당히 혼합함으로써 여러 가지 pH값의 완충 용액을 만들 수 있다. - 겔 전기영동법 : 핵산이나 단백질을 크기, 전하량, 기타 물리적 성질에 따라 분리하기 위해 사용된다. 겔에 홈을 만들어 DNA나 RNA, 단백질 등의 분자를 집어넣고 전류를 흘려주면 음전하를 띤 이들 분자들은 전기적인 힘에 의해 겔 안에서 이동하게 된다. 핵산은 인산기에 의해 음전하를 띠기 때문에 전기장 내에서 양극으로 이동한다. 이 때, 젤에 의해 저항을 받게 되는데 길이가 긴 핵산은 짧은 길이의 핵산보다 많은 저항을 받게 되어 이동속도가 느려지게 되고, 결국 핵산은 그 길이에 따라 서로 다른 위치에서 띠 모양을 나타내게 된다. 2. 재료 및 방법 - 재료 : 마이크로피펫, 전기영동 장치, 대장균 배양액, 멸균 증류수, buffer P1, buffer P2, buffer N3, Pe buffer, eb buffer. 70% 에탄올, RNase A, 이소프로판올. 튜브 2개, 아가로오스분말, TAE용액, 대장균(PQE, pMKE2) 배양용액 1mL, 원심분리기, 피펫 팁 - 방법 ① 8.000rpm에서 3분 동안 원심분리를 통해 세포를 채취한다. ② 박테리아 세포 알갱이들을 Buffer P1 250uL으로 재부유 시킨다. ③ Buffer P2 250uL을 첨가한다. 하고 싶은 말 좀 더 업그레이드하여 자료를 보완하여, 과제물을 꼼꼼하게 정성을 들어 작성했습니다. 위 자료 요약정리 잘되어 있으니 잘 참고하시어 학업에 나날이 발전이 있기를 기원합니다 ^^ 구입자 분의 앞날에 항상 무궁한 발전과 행복과 행운이 깃들기를 홧팅 키워드 용액, 세포, 핵산, 세균, 플라스미드, 분리